Prinsip Eksperimen
Elektroforesis hemoglobin nduweni tujuan kanggo ndeteksi lan ngonfirmasi macem-macem hemoglobin normal lan abnormal.
Amarga beda muatan lan titik isoelektrik saka jinis hemoglobin sing beda, ing larutan buffer pH tartamtu, nalika titik isoelektrik hemoglobin luwih murah tinimbang pH larutan buffer, hemoglobin nggawa muatan negatif lan pindhah menyang anoda sajrone elektroforesis. Kosok baline, hemoglobin kanthi muatan positif pindhah menyang katoda.
Ing voltase tartamtu lan sawise wektu elektroforesis tartamtu, hemoglobin kanthi muatan lan bobot molekul sing beda nuduhake arah lan kecepatan migrasi sing beda. Iki ngidini pamisahan zona sing béda, lan analisis scanning colorimetric utawa electrophoretic sabanjure bisa ditindakake ing zona kasebut kanggo ngitung macem-macem hemoglobin. Cara sing paling umum digunakake yaiku elektroforesis membran selulosa asetat pH 8.6.
Ing sitoplasma, gugus etilena glikol (CHOH-CHOH) ana ing zat glikogen utawa polisakarida (kayata mucopolysaccharides, mucoprotein, glikoprotein, glikolipid, lan liya-liyane) dioksidasi dening asam périodik lan diowahi dadi gugus aldehida (CHO-CHO). Gugus aldehida iki gabung karo reagen Schiff abang-ungu sing ora ana warna, mbentuk pewarna abang-ungu sing disimpen ing ngendi polisakarida ana ing sel. Reaksi iki dikenal minangka pewarnaan asam-Schiff (PAS), sing sadurunge diarani pewarnaan glikogen.
Metode Eksperimen
Bahan:Selulosa asetatmembrane, piranti elektroforesis(DYCP-38C lan sumber daya DYY-6C), Unggul Sample Loading Tool(pipet)spektrofotometer, kuvet kolorimetri, buffer.
Buffer:
(1) pH 8,6 TEB Buffer: Timbang 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g asam borat, lan tambahake banyu suling nganti 1000 ml.
(2) Borate Buffer: Timbang 6,87 g boraks lan 5,56 g asam borat, lan tambahake banyu suling nganti 1000 ml.
tata cara:
Preparasi saka Solusi Hemoglobin
Njupuk 3 ml getih sing ngemot heparin utawa natrium sitrat minangka antikoagulan. Centrifuge ing 2000 rpm kanggo 10 menit lan mbuang plasma. Cuci sel getih abang kaping telu nganggo saline fisiologis (750 rpm, sentrifugasi 5 menit saben wektu). Centrifuge ing 2200 rpm kanggo 10 menit lan discard supernatant. Tambahake banyu suling kanthi jumlah sing padha, banjur tambahake 0,5 kaping volume karbon tetraklorida. Goyangake kanthi kuat nganti 5 menit, banjur centrifuge ing 2200 rpm suwene 10 menit kanggo ngumpulake solusi Hb ndhuwur kanggo digunakake mengko.
Rendhem Membrane
Cut membran selulosa asetat dadi strip ukuran 3 cm × 8 cm. Rendhem ing buffer pH 8,6 TEB nganti kebak, banjur copot lan garing nganggo kertas saring.
Spotting
Gunakake pipet kanggo nyelehake 10 μl larutan hemoglobin kanthi vertikal menyang membran selulosa asetat (sisih kasar), kira-kira 1,5 cm saka pinggir.
Elektroforesis
Tuangake larutan buffer borat menyang kamar elektroforesis. Selehake membran selulosa asetat kanthi sisih sing katon ing ujung katoda kamar. Mbukak ing 200 V kanggo 30 menit.
Elusi
Potong zona HbA lan HbA2, lebokake ing tabung uji sing kapisah, lan tambahake 15 ml lan 3 ml banyu suling. Goyangake alon-alon kanggo ngilangi hemoglobin kanthi lengkap, banjur nyampur.
Colorimetry
Nol absorbansi nggunakake banyu suling kanggo solusi elusi lan ngukur absorbansi ing 415 nm.
Petungan
HbA2(%) = Penyerapan tabung HbA2 / (Penyerapan tabung HbA × 5 + Penyerapan tabung HbA2) × 100%
Pitungan Asil Eksperimental
Rentang Referensi kanggo pH 8.6 TEB Buffer Selulosa Asetat Elektroforesis: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
Cathetan
Wektu elektroforesis ora kudu dawa banget. Membran selulosa asetat ngirim ora garing nalika elektroforesis. Mungkasi elektroforesis nalika HbA lan HbA2 dipisahake kanthi jelas. Elektroforesis sing dawa bisa nyebabake difusi pita lan burem.
Aja nggunakake sampel sing akeh banget. Cairan hemoglobin sing berlebihan bisa nyebabake detasemen pita utawa pewarnaan sing ora cukup, nyebabake tingkat HbA sing salah.
Nyegah kontaminasi membran selulosa asetat karo protein.
Saiki ngirim ora dhuwur banget; Yen ora, pita hemoglobin ora bisa dipisahake.
Tansah kalebu spesimen saka individu normal lan perlu dikenal hemoglobin abnormal minangka kontrol.
Beijing Liuyi Bioteknologi ngasilake tangki elektroforesis profesional kanggo elektroforesis hemoglobin sing dadi modelDYCP-38Ctank elektroforesis membran selulosa asetat, lan ana rong model sumber daya elektroforesis sing kasedhiya kanggo tangki elektroforesis membran selulosa asetatDYY-2ClanDYY-6Csumber daya.
Kangge, Beijing Liuyi Bioteknologi nyedhiyakake membran selulosa asetat kanggo pelanggan, lan ukuran membran selulosa asetat bisa disesuaikan. Sugeng rawuh kanggo njaluk conto lan informasi luwih lengkap.
Merek Beijing Liuyi duwe sejarah luwih saka 50 taun ing China lan perusahaan kasebut bisa nyedhiyakake produk sing stabil lan berkualitas ing saindenging jagad. Liwat taun pembangunan, iku pantes pilihan sampeyan!
We are saiki looking for partners, loro OEM tank elektroforesis lan distributor tampi.
Yen sampeyan duwe rencana tuku produk, aja ragu-ragu hubungi kita. Sampeyan bisa ngirim pesen ing email[email dilindhungi]utawa[email dilindhungi], utawa monggo nelpon kita ing +86 15810650221 utawa nambah Whatsapp +86 15810650221, utawa Wechat: 15810650221
Wektu kirim: Sep-20-2023